Įprastinė stulpelių chromatografija
2.Chromatografinis stulpelis (sukimosi tipas)
3.CHROMATOGRAFINIS STLIDAS (vadovas)
*** Kainų sąrašas visumai aukščiau, pasiteiraukite, kad gautume
Aprašymas
Techniniai parametrai
Įprastinė stulpelių chromatografijaNaudoja skirtingų medžiagų pasiskirstymo santykio skirtumus tarp nejudančios fazės ir mobilios fazės arba skirtingos fiksuotų fazių sulaikymo galimybių, palyginti su skirtingomis medžiagomis, siekiant atskirti medžiagą. Kai mišinys teka per chromatografinę kolonėlę su mobilia faze, jis sąveikaus su nejudančia kolonėlės faze (pvz., Ištirpimas, adsorbcija ir kt.). Dėl kiekvieno mišinio komponento fizinių ir cheminių savybių ir struktūrų skirtumų, jų sąveikos su stacionarioje fazėje dydis ir stiprumas taip pat skiriasi. Esant tokiai pačiai varomei jėgai, kiekvieno stacionarios fazės komponento sulaikymo laikas yra skirtingas, todėl mišinio komponentai iš kolonėlės teka tam tikra tvarka, pasiekdami atskyrimą.
Parametras
Pesticidų likučių aptikimas
 |
 |
 |
 |
Mes dažnai tai sakomeĮprastinė stulpelių chromatografijaiš tikrųjų yra stulpelių chromatografijos atskyrimas, dar žinomas kaip stulpelių chromatografija. Pirmiausia jį išrasti ir naudoti Rusijos mokslininkai 1903 m. Jis susmulkino augalų pigmentų tirpalą į kalcio karbonato miltelius ir ant kalcio karbonato miltelių buvo rastas skirtingų spalvų juostų iš viršaus į apačią. Atskiriant ir ekstrahuojant skirtingas spalvų juostas, buvo gauta palyginti gryna chlorofilas, liuteinas ir kt.
Po šimto metų vystymosi šis metodas tapo santykinai subrendęs, o nejudanti fazė taip pat išsivystė iš vieno kalcio karbonato miltelių iki aliuminio oksido (kurį galima suskirstyti į rūgščių, neutralius, šarminius), silikagelį, aktyvuotą anglies ir tt. Tarp jų, silicia gelis yra dažniausiai naudojama didžiosiose laboratorijose, paprastai padalijant į normalų fazių silikos gelį ir kt.
Stacionarią fazę (silikagelį) paprastai reikia išgryninti ir suaktyvinti, o dalelių dydis turėtų būti vienodas. Teoriškai, kuo mažesnis dalelių dydis ir kuo didesnis paviršiaus plotas masės vienetui, tuo didesnė adsorbcijos talpa ir tuo geresnis atskyrimo efektas.
Tačiau praktiškai, kai fiksuotos fazės dalelės yra per mažos, dažnai būna dvi situacijos: viena yra ta, kad jos yra lengvesnės ir lengvai plūduriuoja ore (silikagelio gelis negali būti skaidomi žmogaus kūnas, o kuo jis yra smulkesnis, tuo toksiškesnis); Antra, mažos dalelės taip pat gali sukelti mažus tarpus tarp dalelių, todėl lėtai tirpiklio srauto greitis ir laiko sunaudojimas; Laikant silikono kaip pavyzdį, didžiausias komerciškai naudojamas silikono dydis šiuo metu yra 200-300 tinklelis.
Kalbant apie stulpelių pravažiavimo metodus, be automatinės analizės įrangos, tokios kaip priekinės cirkuliacijos paruošimas, efektyvus skysčio fazės paruošimas ir anksčiau minėtos stulpelių praeinančios mašinos, rankinės stulpelio praėjimas daugiausia padalintas į tris tipus: atmosferos slėgio kolonėlės pravažiavimas, depresijos skilties praėjimas ir slėgio stulpelio perdavimas.
Tarp jų, dėl depresijos per kolonėlę sumažėja prastas adsorbcijos efektyvumas dėl greito eliuento srauto greičio, dėl kurio prarandama didžioji dalis dėklų skaičiaus ir blogo atskyrimo efektyvumo. Jis tinka mėginiams atskirti santykinai atviromis TLC plokštelėmis, ypač mėginiams, kurių produkte yra tik viena didelė poliarinė priemaiša; Didžioji laiko dalis praleidžiama išankstiniam junginių apdorojimui, pašalinant kai kurias priemaišas prieš kruopščiai išvalyti. Reikėtų pažymėti, kad tirpiklio išgarinimas, kurį sukelia neigiamas slėgis naudojimo metu, gali sukelti daugybę vandens lašelių išorinio kolonėlės paviršiaus. Vandeniui jautrūs junginiai neturėtų būti lengvai bandomi.
Pravažiavus atmosferos slėgio kolonėle yra efektyviausias atskyrimo metodas tarp trijų, tačiau kadangi tirpiklis dažnai juda per lėtai, net geriausias atskyrimo efektas gali turėti įtakos efektyvumui. Todėl šiuo metu paprastai taikomas slėgis, kuris vadinamas slėgio kolonėle; Tačiau slėgis neturėtų būti per didelis. Paprastai rankiniam veikimui naudojamas dvigubos grandinės rutulys, o automatiniam eksploatavimui naudojamas žuvies siurblys. Abu galima modifikuoti, kaip parodyta paveikslėlyje.
Įprastinis stulpelių kirtimo procesas:
Paruošimo darbai turėtų būti atlikti gerai:
Pasirinkdami stulpelį, stebėkite, ar yra šlifavimo lenta. Stulpeliams be šlifavimo lentų nepamirškite užpildyti dugno šiek tiek medvilnės. Medvilnė neturėtų būti per stora ar per plona, jei ji gali užkirsti kelią silikonui. (Tinklaraštininkas tiesiogiai išardė drabužių pakabą ir panaudojo jį medvilnei įkišti į lizdą ant kištuko)
Paruoškite minimalaus poliškumo, UV lempos (rekomenduojamą laboratorijos personalui, rankiniu būdu, paruoštas bet kuriuo metu nusifotografuoti), slėgio įrangą ir bandymo lentyną prireikus!
Pasirinkite tinkamą stulpelį, įpilkite silikono gelio, pamirkykite silikono gelį ir išlyginkite jį
PasirinkimasĮprastinė stulpelių chromatografijayra labai svarbus, ir jų dydis turėtų būti apskaičiuojamas atsižvelgiant į produkto kiekį, kurį paprastai galima suskirstyti į:
Keli miligramai stulpelio (galutinis pasirinkimas visam sintezei);
Kelių dešimčių miligramų stulpelis (metodinis išplėtimo substratas);
500 miligramų iki 1 gramo kolonėlės (naudojant metodiką kaip žaliavą);
Stulpai apie 5G ir didesnės svarstyklės.
Dažniausias kolonėlės skersmens ir aukščio santykis laboratorijoje paprastai yra nuo 1: 2,5 iki 1:15. Silikagelio kiekis, naudojamas kaip nejudanti fazė mėginio apkrovos metu, yra apie 20–40 kartų didesnis nei mėginio. Stulpelių pasirinkimo standartas turėtų būti grindžiamas jūsų mėginio laipiojimo plokštele. Jei arti yra daug priemaišų, pabandykite kuo daugiau pasirinkti didesnę kolonėlę, kad jūsų mėginys būtų padengtas mažu plonu sluoksniu (rekomenduojamas storis, mažesnis nei 5 mm). Jei priemaišos yra toli, šį storią natūraliai galima padidinti, tačiau nerekomenduojama, kad jūsų mėginio storis viršytų 2 cm, nebent produktas būtų tiesiog plaunamas.
Daugelis žmonių daro klaidą galvodami, kad pridedant daugiau silikono, net jei mano mėginyje yra storesnis, ar jis gali būti gerai atskirtas? Šis atsakymas yra neigiamas!
Priežastis ta, kad šie žmonės niekada negalvojo, kad apačioje ir aukštesniuose pavyzdžiuose nėra toje pačioje linijoje, todėl jie galėjo gauti tik grynus, iš kurių dauguma buvo perbraukti, jau nekalbant apie nešvarius, eikvodami laiką ir tirpiklius!
Štai kodėl mėginiui reikia retinti!
Pasirinkus stulpelį, pridedant silikoną galima padaryti per tiekimo kanalą. Tuo pačiu metu būtinai dėvėkite kaukę ir dirbkite dūmų gaubte. To priežastis nebus pateikta tinklaraštininko (silikozė).
Kalbant apie silikagelio įsiskverbimą, rekomenduojamas procesas yra toks: Pirmiausia įdėkite silikagelio kolonėlę su silikagelio sumontuotais vertikaliai, išlyginkite silikagelio gelio paviršių ranka, prijunkite silikagelio kolonėlės dugną prie vandens siurblio, išpurškite silikos gelį ir užpilkite mažiausią poliarinį elantą iš viršaus. Kai „Eliument“ nutekės, uždarykite išjungimo vožtuvą, kad tirpiklis negalėtų siurbti į vandens siurblį.
Tuomet, esant slėgiui, silikono gelis gali būti tolygiai mirkytas praplaunant septynių ar aštuonių stulpelių tūrius su mažiausiais besivystančiojo agento kiekiais.
Aukščiau pateiktas pavyzdys
Mėginių ėmimas padalinamas į šlapias mėginius ir sausas mėginių ėmimas.
(1) Šlapias mėginių ėmimas.
Rekomenduojamas metodas yra naudoti pipetę su guminiu antgaliu, kad būtų galima čiulpti mėginį, netoli viršutinės silikono gelio dalies, lėtai ir tolygiai lašinkite mėginį, kol jis uždengs sluoksnį, tada nustokite pridėti mėginį ir šiek tiek slėgio panardinkite riebią medžiagą į silikono gelio sluoksnį; Panaikinkite riebią medžiagą į silikono sluoksnį ir pakartokite šį procesą kelis kartus, kol visi mėginiai bus pakrauti!
Kai kuriems naujiems studentams gali būti įdomu, kodėl ši operacija vykdoma, o ne padengti šlapio proceso aliejų, pavyzdžiui, medžiagą vienu metu?
Tiesą sakant, ši operacija gali sumažinti efektyvų mėginio sluoksnio aukštį. Šiuo metu jau prasidėjo stulpelių chromatografija, o vėlesni mėginiai yra tarsi tirpikliai, stumiantys ankstesnius mėginius į adsorbą ir desorb silikagelio gelinyje.
(2) Kalbant apie sausą mėginių ėmimą.
Nebent būtina, kad tai nerekomenduojama. Kietųjų mėginių labiau rekomenduojama sumušti ar kristalizuoti. „Nuklysti metodai, etilo acetatas ir vanduo, ultragarsinis virpesių, padedančių kristalizuoti aukštą virimo aliejų, kristalizaciją“ ir „dalijantis laboratorijos perkristalinimo metodu“.
Sausas mėginių ėmimas paprastai kelia dvi problemas; Viena vertus, mėginio maišymo metu, mėginio ir silikagelio reakcijos galimybė padidėja dėl poreikio pakelti rotacinio išgarinimo temperatūrą; Kita vertus, sausa apkrova reiškia, kad adsorbentai bus įvesti į mėginio sluoksnį, padidindami mėginio sluoksnio aukštį arba kolonėlės dydį, reikalaujant daugiau laiko ir daugiau tirpiklio.
Jei nėra kito pasirinkimo, paprasčiausiai supilkite adsorbuotus miltelius lėtai į kolonėlę, kad pakrautumėte, su kai kuriais reikalavimais, panašiais į šlapius metodus.
Įpilkite bevandenio natrio sulfato arba kvarco smėlio
Siekiant išvengti įtakos mėginio sluoksniui pridedant elimo, sukeliant nelygumą, deformaciją ir įtaką atskyrimo efektyvumui, ant mėginio sluoksnio viršuje yra bevandenio natrio sulfato ar kvarco smėlio sluoksnis.
Mūsų inžinieriai asmeniškai nori dėti bevandenį natrio sulfatą, nes jis taip pat turi džiovinimo funkciją ir yra draugiškas tirpikliams, tokiems kaip dichlorometanas, kuris yra linkęs į lakitus, šilumos absorbciją ir kondensaciją!
Gradiento eliuavimas, mėginių ėmimas ir surinkimas
Įkrovę pirmiausia nuplaukite kolonėlę su mažu poliariniu tirpikliu (tirpikliu, kuris neleis produktui praeiti) 2-3 kolonėlės tūriams (vienas stulpelio tūris yra apibrėžiamas kaip mobiliosios fazės tūris, tekantis ir išeinantis į išorę), kad būtų užtikrintas vienodumas, ir tada pasirinkti išimties proporciją.
Kaip išsirinkti elantą, kuris praeina per stulpelį?
Eluento santykis yra santykis, kai jūsų produktas pasiekia maždaug 0. 2 RF vertę. 2 TLC plokštelėje
Tai yra kolonų skalbimo patirtis, kurią perskaičiau daug knygų ir pasidalinau, o tikrasis procesas taip pat yra labai panašus. Asmeniškai aš norėčiau du kartus sumažinti nuolydį.
Pvz., Jei TLC plokštelės laipiojimo tirpiklis yra PE/ea =2: 1, tinklaraštininkas labiau linkęs pradėti gradiento eliavimą iš PE/ea =4: 1 ir pabaiga PE/EA =2: 1, paprastai gaunant geresnius rezultatus.
Renkant elentą taip pat yra metodų. Pirmiausia galite pasirinkti didesnį bandymo vamzdelį, kad jį gautumėte, ir kai TLC artėja prie tikslinio taško, perjunkite į mažesnį bandymo vamzdį. Tai gali sumažinti galimybę gauti daugiau ir išvengti priemaišų.
Jei susiduriate su situacijomis, kai priemaišų taškai ir produkto taškai yra arti vienas kito, ypač tų, kuriems yra silpna fluorescencija, nepamirškite daryti spaudimo. Vietoj to, pasirinkite praeiti stulpelį esant normaliam slėgiui ir keiskite vamzdelį kiekvieną kartą, kai sujungta pusė ar mažiau vamzdžių, o tai taip pat gali padidinti valymo tikimybę.
Nepamirškite laiku susitvarkyti su kolonu!
Daugelis žmonių turi įprotį daryti prielaidą, kad kolona buvo perduota ir džiovinama, kai viename ar dviejuose vamzdeliuose nėra produkto po TLC vėlesniame etape.
Tik supratau, kad išimtis buvo per mažas, kai jį apskaičiavau, arba, eidamas pasidaryti spektro, radau, kad spektras buvo neteisingas ir praleido neteisingą tašką. Aš gailėjausi giliai.
Taigi, užpildžius norimą tašką, rekomenduojama neskubėti apdoroti stulpelio. Vietoj to, prieš perdirbdami, atlikite branduolinį magnetinį rezonansą.
Jei esate užsiėmęs ar skubate su tuo valyti kitus junginiusĮprastinė stulpelių chromatografija, Rekomenduojama skalauti su dideliu poliškumu gerybiniu mišriu tirpikliu ir palikite šią eliuento dalį atskirai identifikavimo rezultatams.
Populiarus Žymos: Įprastinė stulpelių chromatografija, Kinijos įprastų kolonų chromatografijos gamintojai, tiekėjai, gamyklos
Siųsti užklausą
